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HPLC-ELSD檢測方法測定黃芪注射液中黃芪甲苷的含量

黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）

Bge.Var.mongholicus（Bge.）Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.的干燥根。春秋兩季采挖，除去須根及根頭，曬干。

由于來源、產(chǎn)地、處理方式的不同，會導致黃芪的質(zhì)量*不同，從而直接影響其藥用價值，因此必須建立一套完整的質(zhì)量控制方法。

一、實驗過程

1.1 儀器

ELSD MODEL 200  SofTA Coporation

  液相系統(tǒng)：泵

  工作站：色譜采集系統(tǒng)

1.2 試劑

乙腈：色譜純

水  ：純凈水

甲醇：色譜純

黃芪甲苷對照品；黃芪注射液；黃芪陰性試劑

1.3 色譜系統(tǒng)及ELSD參數(shù)

  色譜柱：C18   5μ  250×4.6mm

流動相：乙腈：水（32：68）

流速：1.00 mL/min

ELSD參數(shù)： DF=60℃；SC=30℃

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下圖為在上述色譜條件下測定的黃芪對照品與黃芪注射液ELSD色譜圖：

1.4 曲線方程及線性關系

取對照品溶液配制成0.1、0.3、0.5、0.7、1mg/mL的溶液，以濃度對數(shù)值為橫坐標，以峰面積對數(shù)值為縱坐標作回歸，方程為：y=1.48528x+2.26890，r²=0.9997，進樣量為20μL（滿環(huán)進樣），濃度在0.1-1mg/mL呈良好的線性關系。

1.5 系統(tǒng)適應性實驗

取供試品溶液2.0mL，按上述色譜條件，滿環(huán)進樣20μL，黃芪甲苷的保留時間為9.5min左右，理論塔板數(shù)不低于10000，托尾因子為1.06左右，分離度不小于5.0。

1.6樣品的含量測定

分別取黃芪注射液三批，按上述色譜條件，滿環(huán)進樣20μL。測定結果見表1。

表1樣品中黃芪甲苷的含量測定

二、討論

ELSD主要用于沒有紫外吸收或為紫外末端弱吸收的樣品，或流動相有紫外吸收干擾或梯度洗脫時基線漂移影響測定;用ELSD檢測,流動相在漂移管便氣化蒸發(fā),不影響樣品檢測。

黃芪甲苷是黃芪為原料的中藥制劑的主要質(zhì)量控制指標。其含量測定方法有薄層色譜、HPLC—紫外放，采用ELSD作為檢測器—HPLC法也已見報道，但都存在樣品前處理復雜、色譜干擾多且干擾成分大等缺點。

由于ELSD本身的響應特性，黃芪甲苷濃度與其峰面積值并不呈線性，而將濃度與峰面積同時取以10為底的對數(shù)后可在一定范圍內(nèi)（0.1～1mg/ml）得到理想的線性關系（r²=0.9997）。